一般講，診斷軟下疳要特別謹慎，因為目前本病并不常見，但是如符合如下條件者可以作出診斷。
　　
　　1、發病前有不潔性交史。
　　
　　2、男女生殖器及尿道口出現一個或更多的潰瘍，基底軟，有疼痛與觸痛。
　　
　　3、單側腹股溝橫痃，疼痛，潰瘍排膿。
　　
　　4、暗視野檢查梅毒螺旋體陰性。
　　
　　5、涂片作姬姆薩染色查不到多諾萬小體(由日本人宮川發現的一種導致性病淋巴肉芽腫的致病菌)。
　　
　　6、梅毒血清試驗陰性。
　　
　　7、革蘭氏染色，可查到陰性鏈球菌，但可產生假陽性，有條件者可作細養。